Alkaloid from Geissospermum sericeum Benth. & Hook.f. ex Miers (Apocynaceae) Induce Apoptosis by Caspase Pathway in Human Gastric Cancer Cells.

Abstract

Resumo: O câncer gástrico está entre as principais causas de morte por neoplasia no mundo, com altas taxas de incidência e problemas relacionados ao seu tratamento. Aqui, descrevemos como Geissospermum sericeum exerce atividade antitumoral na linhagem celular ACP02 (adenocarcinoma gástrico humano) e o mecanismo de morte celular. O extrato etanólico e as frações, fração neutra e fração alcaloide, foram caracterizados por cromatografia em camada delgada e HPLC-DAD, produzindo um alcaloide (geissosquizolina N4-metilcloro) identificado por RMN. A atividade citotóxica das amostras (extrato etanólico, fração neutra, fração alcaloide e geissosquizolina N4-metilcloro) em células HepG2 e VERO foi determinada por MTT. A linhagem celular ACP02 foi usada para avaliar o potencial anticâncer. A morte celular foi quantificada com os corantes fluorescentes Hoechst 33342, iodeto de propídio e diacetato de fluoresceína. A geissosquizolina N4-metilcloro foi avaliada in silico contra caspases 3 e 8. Na avaliação antitumoral, observou-se efeito inibitório mais significativo da fração alcaloide (CI50 18,29 μg/mL) e da geissosquizolina N4-metilcloro (CI50 12,06 μg/mL). Entretanto, a geissosquizolina N4-metilcloro apresentou menor citotoxicidade nas linhagens celulares VERO (CC50 476,0 μg/mL) e HepG2 (CC50 503,5 μg/mL), com alta seletividade contra células ACP02 (SI 39,47 e 41,75, respectivamente). A fração alcaloide apresentou apoptose e necrose mais significativas em 24 h e 48 h, com aumento da necrose em concentrações mais elevadas e maior tempo de exposição. Para o alcaloide, a apoptose e a necrose foram dependentes da concentração e do tempo, com menor taxa de necrose. Estudos de modelagem molecular demonstraram que a geissosquizolina N4-metilcloro pode ocupar o sítio ativo das caspases 3 e 8 de forma energeticamente favorável. Os resultados mostraram que o fracionamento contribuiu para a atividade, com seletividade pronunciada para células ACP02, e a geissosquizolina N4-metilcloro é uma candidata promissora para inibidores de caspases de apoptose em câncer gástrico. Assim, este estudo fornece uma base científica para as funções biológicas de Geissospermum sericeum, bem como demonstra o potencial da geissosquizolina N4-metilcloro no tratamento do câncer gástrico.